脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑

保存條件 2-4℃保存一年（避免冷凍）。

脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品簡介：

Lip2000 是一種新型的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸（DNA 和 RNA）轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞，具有低細(xì)胞毒性；對(duì)多種類型的細(xì)胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。適用范圍：貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（脯乳動(dòng)物細(xì)胞系）的轉(zhuǎn)染。

質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染：

對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，DNA（µg）與 Lip2000（µI）的比例為 1:2~3。轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。

1.  以 24 孔板為例

a.  貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用 500 µI 不含抗生素的培養(yǎng)基接種 0.5-2×10

⁵ 細(xì)胞，使之第二天能達(dá)到 70- 90%匯合。

b.  懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備 DNA-Lip2000 復(fù)合物之前，用 500 µI 不含抗生素的培養(yǎng)基接種 4-8×10

⁵ 細(xì)胞即可。

2.  對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作

a.  在eppendorf管里分別加入50 µI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA，輕柔混勻，制成DNA稀釋液。

b.  在另一個(gè)eppendorf管里分別加入50 µI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和2.0 µI Lip2000（注意用前 先混 勻），輕柔混勻，制成Lip2000 稀釋液，室溫靜置5分鐘。

c.  將DNA稀釋液和Lip2000稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘，形成DNA-Lip2000復(fù)合物。DNA-Lip2000復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時(shí)。

3.  將DNA-Lip2000復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合物分散均勻。

4.  在37℃ 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí)后更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)18-48小時(shí)。

5.  如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后將細(xì)胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可以對(duì)DNA和Lip2000的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，一般在1: 0.5~5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA （µg）和Lip2000（µI）的比例。